血液中細(xì)菌內(nèi)毒素常用測(cè)定方法

1968年自Levin和Bang發(fā)現(xiàn)并建立鱟試驗(yàn)方法以來(lái)，就逐漸得到臨床及藥檢部門(mén)的重視和研究。尤其是在臨床檢驗(yàn)方面的應(yīng)用更是飛速發(fā)展。在鱟試驗(yàn)法建立的初期，Levin就使用該法用于測(cè)定病人血漿中的內(nèi)毒素，之后其應(yīng)用范圍也越來(lái)越廣。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步發(fā)展，鱟試驗(yàn)方法的研究也逐漸完善，從最初的定性凝膠法逐漸向靈敏度更高的微量定量方面發(fā)展，因此使血液中內(nèi)毒素測(cè)定變得更加快速、準(zhǔn)確，更加適用于臨床各種內(nèi)毒素感染癥狀的診斷。

目前，在日本國(guó)內(nèi)，以合成基質(zhì)法為中心的血漿中的內(nèi)毒素含量測(cè)定研究進(jìn)行得比較深入，而且也是近年來(lái)文獻(xiàn)報(bào)道最多的，據(jù)說(shuō)在此領(lǐng)域日本的研究工作一直處于世界前列。加之測(cè)定儀器以及專用TAL試劑不斷完善，使測(cè)定方法方面也越來(lái)越方便簡(jiǎn)單。同時(shí)用于血漿內(nèi)毒素測(cè)定試劑在日本已形成商品化，并獲得厚生省批準(zhǔn)。

我國(guó)在70年代開(kāi)始就已經(jīng)使用TAL試劑檢測(cè)病人血漿中的內(nèi)毒素研究，但由于檢測(cè)方法及TAL試劑的開(kāi)發(fā)緩慢，目前在臨床上的應(yīng)用還很少，同國(guó)外間差距還很大。下面就血漿中內(nèi)毒素測(cè)定等方面內(nèi)容作一簡(jiǎn)要介紹，同時(shí)希望國(guó)內(nèi)能在這一領(lǐng)域的研究和應(yīng)用盡快趕上國(guó)際發(fā)展水平，以提高我們內(nèi)毒素研究和檢測(cè)水準(zhǔn)。

國(guó)外常用測(cè)定方法

作為機(jī)體中細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定，除了腎上腺素皮膚試驗(yàn)外，還主要有發(fā)育雞卵試驗(yàn)，Pertusis treated mouse test platelet agglutination rat Lethalitytest等的bioassay方法，然而這些方法普通檢出靈敏度低，特異性差，實(shí)用性不大。自鱟試驗(yàn)法建立以來(lái)，由于檢出靈敏度高，特異性強(qiáng)，簡(jiǎn)便實(shí)用，是目前普遍采 用的一種分析手段。作為血液，由于成分組成比較復(fù)雜，同時(shí)含有許多干擾鱟試驗(yàn)反應(yīng)的物質(zhì)（如各種蛋白酶抑制劑，內(nèi)毒素結(jié)合蛋白等），因此分離這些干擾物質(zhì)即血液前處理工作是極為重要的。目前除去血液中的干擾因子（inhibiter） 的前處理方法主要有：血清稀釋法，pH變動(dòng)法，氯仿提取法、PCA法等。而用于檢測(cè)人體中內(nèi)毒素測(cè)定法主要為鱟試驗(yàn)法中的凝膠法，比濁比色法、免疫測(cè)定等方法。其測(cè)定原理如下所示:  

隨著分析手段的不斷進(jìn)步，目前定性的凝膠法已很少使用，相比微量定量的動(dòng)態(tài)濁度法（kinetic turbimetric Assay）終點(diǎn)比色法以及動(dòng)態(tài)比色法的使用率逐年上升。尤其在日本臨床普遍采用動(dòng)態(tài)比色法的分析手段，而且已逐漸發(fā)展到全血的微量定量。