鱟試驗(yàn)法在檢測(cè)前時(shí)應(yīng)做什么？

鱟試驗(yàn)法（鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(yàn)）是第一個(gè)被美國作為檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的法定方法的，美國還將此法納入了美國藥典第20版（1980）中，并對(duì)該法進(jìn)行了非常詳盡的介紹。慢慢地，也有許多國家也將鱟試驗(yàn)法作為檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的法定方法。現(xiàn)在就以美國為例子，來詳細(xì)闡明鱟試驗(yàn)法。

美國食品藥品管理局（FDA）有這樣一條準(zhǔn)則，即只要是給人類使用的藥品、生物制劑、醫(yī)療器械等產(chǎn)品最后一定要使用鱟試驗(yàn)法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，只有檢測(cè)過關(guān)的產(chǎn)品才能得到美國食品藥品管理局的承認(rèn)。

那鱟試驗(yàn)法作為檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的法定方法，在進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)前應(yīng)該做些什么呢？

首先，需要對(duì)鱟試劑的靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。

不同的實(shí)驗(yàn)室對(duì)鱟試劑的操作肯定會(huì)出現(xiàn)不同的差異，所以檢測(cè)人員在進(jìn)行檢測(cè)前必須要對(duì)同一批次的鱟試劑以及同一批次的內(nèi)毒素作稀釋度試驗(yàn)。一般來說只需要4~8個(gè)批次試驗(yàn)即可，然后再以2倍的倍比稀釋來選取終點(diǎn)范圍值作鱟試驗(yàn)法。

終點(diǎn)的細(xì)菌內(nèi)毒素含量用ng/ml進(jìn)行表示，接著將其換算成log值，最后再來計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差，即SD值。如果出現(xiàn)了4個(gè)批次的稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)差值都小于或者等于標(biāo)準(zhǔn)差值99%的限度值，那么該方法是可以進(jìn)行使用的。但是，如果標(biāo)準(zhǔn)差值有8個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)差超過99%的上限值，那么該方法就會(huì)因?yàn)樽儺愝^大而不能使用，必須要在重新試驗(yàn)前找出不可用的原因再進(jìn)行糾正。

假如實(shí)驗(yàn)室最終通過了上面出現(xiàn)異常的變異試驗(yàn)，接下來就應(yīng)該按照一系列濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（RSE）或?qū)φ諛?biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（CSE）來檢測(cè)鱟試劑的靈敏度，若最終鱟試劑的靈敏度差異沒有超過標(biāo)定值的2倍稀釋，那最終鱟試劑的靈敏度是可行的。

其次，要對(duì)鱟試劑進(jìn)行抑制與增強(qiáng)試驗(yàn)。

將一種藥物與水中的一系列同種內(nèi)毒素濃度進(jìn)行比較，其中該藥物含有不同的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（靈敏度以鱟試劑標(biāo)定），待檢測(cè)結(jié)果出來后，再比較標(biāo)準(zhǔn)系列的內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果和藥物中的內(nèi)毒素檢測(cè)量，如果兩者的差異結(jié)果沒有超過2倍的稀釋濃度，則認(rèn)為該藥物有抑制或增強(qiáng)現(xiàn)象。

要注意的是，如果該藥物成分較為恒定，則在檢測(cè)時(shí)只需檢測(cè)該藥物的最高和最-低濃度就可以了，但是如果藥物的濃度都有抑制或者增強(qiáng)的作用，就必須每一種濃度都要進(jìn)行抑制或增強(qiáng)試驗(yàn)。所有法定的藥物檢測(cè)都必須在沒有稀釋或在適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)，且稀釋倍數(shù)不能超過最大有效稀釋倍數(shù)，否則其中的內(nèi)毒素經(jīng)稀釋后將會(huì)出現(xiàn)濃度過低而不被鱟試驗(yàn)法檢出的現(xiàn)象。