細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中凝膠法在藥品中造成異常結(jié)果的原因和解決方法

凝膠法實(shí)驗(yàn)過程時(shí)間短，消耗樣品量少，且具有使用設(shè)備簡(jiǎn)單，費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，作為《中國(guó)藥典》“仲裁"檢查方法，廣泛用于注射劑藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

1.干擾試驗(yàn)的必要性

鱟試劑凝集反應(yīng)是一種二價(jià)陽離子酶反應(yīng)體系，有許多干擾反應(yīng)的物質(zhì)會(huì)干擾凝膠的形成。在新樣品測(cè)定中，必須首先進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素干擾試驗(yàn)，確定是否存在干擾樣品出現(xiàn)縮合反應(yīng)的因素。為了保證所選處理方案能夠在不滅活內(nèi)毒素情況下有效消除干擾，采用預(yù)先添加的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素再處理液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。

2.可能會(huì)出現(xiàn)的異常結(jié)果及其原因和解決方法

2.1造成呈假陰性的可能原因及解決方法

原因可能是：①內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)中存在的一些問題，如滴度標(biāo)注不準(zhǔn)確，過期或貯存不當(dāng)導(dǎo)致失效，稀釋誤差或稀釋振蕩不夠，對(duì)照管沒有達(dá)到2λ陽性內(nèi)毒素濃度；②問題出在鱟試劑。例如，過期失效，振蕩不當(dāng)，靈敏度標(biāo)注不準(zhǔn)確，會(huì)產(chǎn)生氣泡，鱟試劑酶蛋白變性，鱟試劑破壞；③溫控器溫度不符合要求或保溫時(shí)間不夠。

解決辦法包括：規(guī)范內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)的審查和鱟試劑在保質(zhì)期正確儲(chǔ)存和使用的敏感性；內(nèi)毒素稀釋應(yīng)準(zhǔn)確，確保PC管添加2λ內(nèi)毒素；當(dāng)使用可溶解的鱟試劑時(shí)，沿著管壁慢慢加水，讓混合器振蕩30s。避免劇烈振動(dòng)產(chǎn)生氣泡，確保恒溫器溫度和保溫時(shí)間正確。

2.2造成假陽性的可能原因及解決方法

原因可能包括：實(shí)驗(yàn)設(shè)備受到污染，經(jīng)熱原、外源性內(nèi)毒素或微生物污染不能*滅活；試驗(yàn)中由于誤操作造成的內(nèi)毒素污染；BET水不符合要求，內(nèi)毒素超標(biāo)，培養(yǎng)溫度不正確等。解決方案包括：按照2015年版《中國(guó)藥典》的規(guī)定對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行處理；選擇合格的BET水，確保正確的培養(yǎng)溫度、時(shí)間和操作。

總而言之，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法已被列入許多國(guó)家藥典。方法學(xué)研究表明，用細(xì)菌內(nèi)毒素法取代家兔熱原法的藥物種類較多，因?yàn)樗燃彝脽嵩ǜ珳?zhǔn)、快速、簡(jiǎn)捷、經(jīng)濟(jì)、容易推廣等諸多優(yōu)點(diǎn)。